Il corso si propone di fornire agli studenti le basi teoriche della tecnologia del DNA ricombinante, e l’acquisizione delle metodologie di base per lo studio di geni.

Enzimi per il clonaggio del DNA Nucleasi, Fosfomonoesterasi, Polinucleotide chinasi, DNA ligasi, DNA polimerasi, DNA polimerasi RNA dipendente (trascrittasi inversa), Deossinucleotidil trasferasi, PoliA polimerasi, Enzimi di restrizione Sistemi biologici della biotecnologia molecolare Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae Le colture cellulari eucariotiche Biologia di base dei vettori plasmidici e fagici Caratteristiche essenziali dei plasmidi Caratteristiche desiderate dei plasmidi come vettori di clonaggio Caratteristiche essenziali del batteriofago lambda Organizzazione del DNA nei vettori lambda Vettori lambda avanzati Cosmidi, fasmidi ed altri vettori avanzati Vettori cosmidici Vettori BAC e PAC Vettori per clonaggio in S. cerevisiae (plasmidici, YAC e vettori ARS) Vettori derivanti da SV40 La trasformazione genetica dei procarioti Il trasferimento di DNA in E. coli Elettroporazione Metodi di selezione Trasferimento genico nelle piante Trasformazione mediata da Agrobacterium Plasmidi Ti Altri metodi di trasformazione e metodi di ricerca Creazione di genoteche di DNA genomico e cDNA Preparazione del DNA genomico e di cDNA per la generazione di genoteche La PCR come alternativa al clonaggio Strategie di analisi delle genoteche Clonaggio differenziale Tecniche di base della tecnologia del DNA ricombinante Elettroforesi in gel d?agarosio Trasferimento di acidi nucleici su membrana (Southern blot, Northern blot) Ibridazione di acidi nucleici trasferiti su membrana e tecniche di marcatura del DNA Autoradiografia Reazione a catena della polimerasi (RT-PCR, LA-PCR, RACE-PCR, PCR inversa, PCR quantitativa in tempo reale) Sequenziamento e mutagenesi Attivit? di laboratorio Le esercitazioni di laboratorio riguarderanno l?acquisizione delle strategie di base volte alla clonazione di un gene d?interesse a partire da RNA messaggero. 1. Isolamento di RNA in condizioni denaturanti da diversi tessuti di partenza 2. Analisi elettroforetica e spettrofotometrica dell?RNA estratto 3. Sintesi di cDNA dall?RNA isolato, tramite RT PCR 4. PCR con primers degenerati 5. PCR nested 6. Ligasi dei prodotti amplificati in vettori plasmidici 7. Trasformazione dei vettori ricombinanti in E.coli e screening dei cloni ottenuti Una seconda parte dell?attivit? di laboratorio riguarder? l?applicazione di metodi per la ricerca di organismi geneticamente modificati (OGM) in matrici di origine vegetali e in prodotti per l?alimentazione umana e vegetale 1. Isolamento di DNA dai prodotti in esame 2. PCR dell?elemento genetico NOS 3. Visualizzazione dei prodotti di PCR tramite elettroforesi ed interpretazione dei risultati 4. Quantificazione degli OGM tramite PCR in tempo reale

Modalità didattiche

Lezione frontale; laboratorio

Testi di studio

S. Primrose, R. Twyman, B. Old ?Ingegneria genetica. Principi e tecniche?, Zanichelli S.J. Karcher ?Laboratorio di Biologia Molecolare?, Zanichelli G. Mangiarotti "Biologia Molecolare", Piccin D.A. Micklos, G.A. Freyer ?La scienza del DNA?, Piccin

Modalità di
accertamento

Esame orale

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.