CITOPATOLOGIA CLINICA E GENETICA APPLICATA - MODULO DI GENETICA APPLICATA
| A.A. | CFU |
|---|---|
| 2006/2007 | 4 |
| Docente | Ricevimento studentesse e studenti | |
|---|---|---|
| Alessandra Fraternale |
Assegnato al Corso di Studio
| Giorno | Orario | Aula |
|---|
Obiettivi Formativi
Il corso si propone di descrivere alcune recenti applicazioni della ricerca genetica di base e dell’ingegneria genetica nel campo della medicina e delle biotecnologie in generale e di metterne in luce le potenzialità e le problematiche di utilizzo.
Programma
Tecniche principali
Il trasferimento di acidi nucleici su membrana
PCR: RT-PCR, real-time PCR, PCR per la diagnosi di infezioni acute e latenti
Sintesi chimica del DNA: metodo della fosforammidite, sintesi di geni
Sequenziamento del DNA: procedimento dei dideossinucleotidi
Taglio e saldatura di molecole di DNA: enzimi di restrizione, DNA ligasi, adattatori, terminal transferasi
Vettori plasmidici: caratteristiche essenziali, pBR322, pUC
Vettori fagici: il batteriofago , replicazione del DNA del fago , utilizzo del fago come vettore.
Vettori cosmidici: caratteristiche generali
Clonaggio in E. coli: vettori di espressione; vettori che massimizzano la sintesi proteica; promotori regolabili: promotore lac, promotore pL, promotore del triptofano; vettori che semplificano la purificazione delle proteine ricombinanti; vettori che favoriscono la solubilizzazione delle proteine espresse.
Produzione di insulina umana in E.coli.
Clonaggio in lievito: vettori episomiali, vettori che si integrano, YAC (yeast artificial chromosome)
Trasferimento genico in cellule animali: cenni
Strategie di clonaggio; il clonaggio di DNA genomico: strategia del Maniatis, il clonaggio di cDNA.
Analisi di genoteche; analisi tramite ibridazione: metodo di Grunstein-Hogness; procedura di plaque-lift. Analisi delle genoteche di espressione (metodo immunologico)
Applicazioni della tecnologia del DNA ricombinante
Animali transgenici: metodo della microiniezione di DNA; metodo del vettore retrovirale; cellule ES; clonazione mediante trasferimento nel nucleo. Applicazione di topi transgenici: studio di funzione e regolazione genica; sistemi modello per le malattie; produzione di proteine ricombinanti. Bovini transgenici. Volatili transgenici.
Acidi nucleici come strumenti diagnostici: diagnosi di malattie infettive, diagnosi prenatale, caratteristiche delle sonde, SNP, RFLP, VNTR.
Modalità Didattiche, Obblighi, Testi di Studio e Modalità di Accertamento
- Modalità didattiche
- Lezione frontale.
- Testi di studio
- "Ingegneria genetica principi e tecniche" Primrose S. Zanichelli "Biotecnologia molecolare, principi ed applicazioni del DNA ricombinante". B.R. Glick, J.J. Pastemak. Zanichelli
- Modalità di
accertamento - Esame orale.
- Disabilità e DSA
Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.
A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.
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