Il corso si propone di fornire agli studenti le basi teoriche e pratiche della tecnologia del DNA ricombinante, offrendo strumenti e metodologie per lo studio dei geni dal DNA alla proteina.

Attività di laboratorio:

1. Isolamento di RNA in condizioni denaturanti da alcuni tessuti di partenza.

2. Analisi elettroforetica e spettrofotometrica dell'RNA estratto.

3. Sintesi di cDNA dall'RNA isolato, tramite RT-PCR.

4. PCR con primers degenerati, specifici e modificati.

5. Clonaggio tramite T/A cloning e ligasi direzionali in vettori plasmidici.

6. Trasformazione di E.coli con vettori ricombinanti e screening delle colonie ottenute.

7. Trasferimento del gene target in vettori di espressione batterici e di lievito.

8. Trasformazione di cellule di lievito, screening e propagazione.

Durante le attività di laboratorio saranno svolte lezioni frontali di biologia molecolare inerenti a ogni singola esercitazione. Gli argomenti trattati saranno:

1. Enzimi per il clonaggio del DNA

2. Sistemi biologici della biotecnologia molecolare

3. Biologia di base dei vettori plasmidici e fagici, cosmidi, fasmidi ed altri vettori avanzati

4. La trasformazione genetica dei procarioti

5. Genoteche a DNA genomico e a cDNA

5.1 Preparazione del DNA genomico e di cDNA per la generazione di genoteche

5.2 La PCR come alternativa al clonaggio

5.3 Strategie di analisi delle genoteche

6. Tecniche di base della tecnologia del DNA ricombinante

6.1 Elettroforesi in gel d'agarosio

6.2 Trasferimento di acidi nucleici su membrana

6.3 Tecniche di ibridazione e marcatura di acidi nucleici

6.4 Reazione a catena della polimerasi

Modalità didattiche

L'attività didattica sarà svolta prevalentemente in laboratorio. Ad ogni attività pratica saranno abbinate lezioni frontali inerenti gli argomenti trattati

Obblighi

L'ammissione alla prova di esame è consentita agli studenti che abbiano frequentato almeno i 2/3 delle ore di laboratorio.

Testi di studio

• Brown T.A. , Biotecnologie molecolari, Zanichelli 
  
• Watson J.D. , Caudy A.A. , Myers R.M. , Witkowski J.A. DNA ricombinante Geni e genomi, Zanichelli
• Karcher S.J., Laboratorio di Biologia molecolare, Zanichelli
• Kreuzer H., Adrianne Massey A., Biologia molecolare e biotecnologie ed. 2010, Zanichelli

Modalità di
accertamento

Esame orale, Tesine di laboratorio.

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Testi di studio

Stessi testi consigliati agli studenti frequentanti. Protocolli e dispense distribuite dal docente durante le lezioni frontali e in laboratorio. 

Modalità di
accertamento

Prova pratica in laboratorio riguardante uno o una parte dei protocolli effettuati durante le lezioni in laboratorio.
In caso di superamento della prova pratica, si procedera con un esame orale.

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Durante il corso lo studente sarà guidato a redigere un quaderno di laboratorio, dove verranno riportate le esperienze, le metodiche, i dati ottenuti, e la valutazione critica dei risultati, correlando la parte teorica con quella specifica di laboratorio.