Raggiungimento da parte degli studenti della capacità di progettare una cassetta d'espressione da utilizzare per ottenere animali transgenici o da utilizzare come vaccini a DNA.

 1) PROMOTORI:
a) Cosa è un promotore;
b) Promotori Ubiquitari;
c) Promotori Inducibili;
d) Promotori tessuto-specifici;
e) Sistema Cre/loxP;

2) MODELLI ANIMALI TRANSGENICI DA LABORATORIO:

a) Cosa è un animale geneticamente modificato;
b) Perché costruire un modello transgenico, Knock-out o Knockin;

INSERZIONE CASUALE:
a) Costruzione della cassetta d'espressione;
b) Scelta del Promotore;
c) Preparazione della cassetta d'espressione;
d) Scelta del modello animale;
e) Il modello murino;
f) Trattamento per la superovulazione;
g) Recupero degli oociti fecondati;
h) Iniezione della cassetta d'espressione nel pronucleo maschile;
i) Reimpianto degli oociti iniettati nelle foster mothers;
j) Preparazione delle foster mothers;
k) Maschi vasectomizzati;
l) Analisi dei fondatori;
m) Ampliamento delle colonie;
n) Mantenimento delle colonie;
RICOMBINAZIONE OMOLOGA
a) Modello di Holliday;
b) Cellule Staminali Embrionali (ESCs);
c) Isolamento delle blastocisti;
d) Recupero delle ESCs dalla Inner Mass;
e) Mantenimento in coltura delle ESCs;
f) Analisi del cariotipo;
g) Costruzione della cassetta per la ricombinazione omologa;
h) Trasformazione delle ESCs;
i) Selezione positiva e negativa;
j) Reimpianto delle EScs nella blastocisti;
k) Reintroduzione delle Blastocisti nell'utero;
l) Analisi delle chimere;
m) Analisi dei fondatori;

3) VACCINAZIONE A DNA:
a) Cosa è un vaccino;
b) Differenza tra un vaccino a DNA e un vaccino tradizionale;
c) Progettazione, Costruzione e Validazione di un vaccino a DNA;
d) Scelta del sito di inoculo;
e) Scelta della tecnica di inoculo;
f) Vie del processamento dell'antigene all'interno del comparto cellulare;
g) Cenni sull'attivazione del sistema immunitario;
h) Utilizzo di adiuvanti;
i) Vaccinazione a DNA antitumorale;
j) Vaccinazione contro l'oncogene erbB2;
k) Scelta del modello animale;
l) erbB2 come antigene self;
m) Modelli animali utilizzati;
n) Plasmidi d'espressione per porzioni dell'antigene;
o) Plasmidi Chimera;
p) Studio della rottura della tolleranza;
q) Utilizzo di siRNA in combinazione con vaccini a DNA;
r) Vaccinazione a DNA per la profilassi di malattie infettive (Influenza A);
s) Vaccinazione a DNA contro malattie parassitarie (Malaria);
t) Vaccinazione a DNA per la profilassi di malattie infettive negli animali di interesse agronomico.

4) "PHAGE DISPLAY LIBRARY" PER L'IDENTIFICAZIONE DI ANTICORPI IN GRADO DI RICONOSCERE EPITOPI CONFORMAZIONALI
a) Principi sulle Phage Display Library
b) Analisi della struttura proteica dell'antigene mediante modellazione molecolare;
c) Costruzione di una libreria mediante frammentazione casuale del cDNA che codifica l'antigene;
d) Costruzione di una libreria con frammenti noti ottenuti mediante PCR;
e) Analisi del folding mediante modellazione molecolare;
f) Identificazione degli epitopi conformazionali mediante ELISA;
g) Identificazione degli epitopi lineari mediante ELISA.

Modalità didattiche

 Didattica frontale.

Obblighi

Possibile frequenza.

Testi di studio

• Biologia Molecolare del Gene della Zanichelli, Watson et al.
• Biologia Molecolare della Cellula della Zanichelli, Alberts et al.

Modalità di
accertamento

 Esame orale con presentazione .ppt.

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.