IL percorso didattico del biennio prevede una serie di materie biologiche atte ad ottenere un concreto inquadramento delle tecniche e metodologie applicate alla diagnostica morfologica dei diversi apparati dell’organismo umano. In tal senso, dopo un primo inquadramento della tecnolgia, il citometro a flusso e dei reagenti vengono trattate le principali metodologie di indagine per l'evidenziazione nel campione del fenotipo di membrana, del ciclo cellulare e di altre funzioni cellulari. Questo modulo affronta tematiche riguardanti una strumentazione tipica del settore della Daignostica citologica clinica e della ricerca in ambito citologico-molecolare. Questa sofisticata tecnica si affianca alle metodologie ad essa correlate per lo studio dei fenomenti cellulari che riguardano il funzionamento delle cellule dell’organismo umano ( citologia-citopatologia clinica), del loro differenziamento e della conseguente costituzione nei diversi tessuti (Istologia-Istopatologia clinica).

Parte generale Struttura del citometro a flusso. Sorgenti d’eccitazione. Sistema fluidico. Sistema ottico. Diffusione della Luce. Light scattering nel citometro a flusso.I Fluorocromi:  Proprietà dei fluorocromi. Fluorocromi base specifici.  Fluorocromi intercalanti. Fluorocromi per l'RNA, per le proteine.  La compensazione e l'Immunofluorescenza a colori multipli. Nozioni generali di cell sorting. Il sorting cellulare. Identificazione delle condizioni ottimali di sorting. Purezza di una separazione. Coincidenza e purezza. Condizioni di sicurezza nel cell sorting.   

Applicazioni in cinetica cellulare  Misure di DNA. Modalità di colorazione. Protocolli.  I doppietti: cosa sono e come sono esclusi dall’analisi. Analisi della ploidia. Analisi degli istogrammi.  Ciclo Cellulare e Cinetica cellulare. Cinetica cellulare: i parametri. Uso dei monoclonali anti BrdU. Cinetica cellulare: applicazioni. Marcatori di proliferazione. Le cicline: proteine di controllo del ciclo cellulare. Regolatori di trascrizione. 

Applicazioni in immunofluorescenza Anticorpi monoclonali. Tecniche di immunofenotipizzazione cellulare in citometria a flusso. Immunofluorescenza diretta a colore singolo o multicolore. Test di immunofluorescenza indiretta classica a colore singolo; doppia indiretta; tripla indiretta Immunofluorescenza indiretta con il sistema biotina/avidina. Marcature di antigeni citoplasmatici e nucleari. Immunofluorescenza quantitativa. 

Applicazioni in biologia cellulare Studio delle funzioni cellulari. Analisi del Ca++ intracellulare. Analisi della funzione mitocondriale. Analisi del potenziale di membrana plasmatica. Analisi della fagocitosi.  Studio e sorting di cromosomi umani.

Modalità didattiche

Lezioni frontali, esercitazioni di laboratorio.

Testi di studio

 Testo: Tecniche di Citometria, ed. Quattroventi c/o Libreria Goliardica

dispense di Citometria scaricabili dal sito della Facoltà: http://scitec.uniurb.it/studenti/studenti_materiale.aspx

Modalità di
accertamento

 esame orale

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Modalità didattiche

in allestimento materiale didattico on-line sul sito di Facoltà

Testi di studio

 Testo: Tecniche di Citometria, ed. Quattroventi c/o Libreria Goliardica

dispense di Citometria scaricabili dal sito della Facoltà: http://scitec.uniurb.it/studenti/studenti_materiale.aspx

Modalità di
accertamento

esame orale

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.