•Caratteristiche chimico-fisiche delle proteine. Termostabilità, peso molecolare, punto isoelettrico, caratteristiche idrofobiche, densità, proprietà di legame. •Recupero del prodotto. Prodotto extracellulare, prodotto intracellulare: lisi della cellula con sistemi meccanici, chimici, fisici, enzimatici. •Separazione. Sedimentazione, centrifugazione differenziale o isopicnica, estrazione con solvente: sistemi liquido-liquido, solido-liquido, sistemi in batch, sistemi continui in controcorrente; dialisi, filtrazione su membrane. •Concentrazione. Evaporazione, ultrafiltrazione, filtrazione tangenziale (Quixstand system), adsorbimento, osmosi inversa, precipitazione di proteine con sali, solventi organici, polietilenglicole, cambio di pH o temperatura. •Separazione cromatografia. Cromatografia a scambio ionico, ad interazioni idrofobiche, di adsorbimento, a setaccio molecolare, matrici dye ligand pseudospecifiche, di affinità, di immunoaffinità, vantaggi e svantaggi delle varie fasi fisse. Fattore di risoluzione della colonna. Fase mobile: criteri per la sua composizione, eluizione stepwise o con gradiente.   •Monitoraggio delle lavorazioni a valle: valutazione del profilo di eluizione con misure di assorbanza UV-VIS, attività enzimatica, conducibilità. Valutazione della purezza della proteina: isoelettrofocalizzazione, elettroforesi mono e bidimensionale, western blotting, analisi HPLC, elettroforesi capillare. •Bilanci di massa. La tabella di purificazione: come si costruisce e quali sono i parametri fondamentali. Analisi dei contaminanti: le enterotossine e i residui dei solventi, formulazione del prodotto, essiccazione, liofilizzazione; sterilizzazione, controllo della stabilità dei prodotti. •Integrazione del processo. Integrazione fra fermentazione e separazione del prodotto; integrazione fra chiarificazione, concentrazione e  purificazione ( adsorbimento su letto espanso) •Implementazione su macroscala . Problemi nel passaggio dallo studio pilota al  protocollo industriale: rapporto fra volumi di eluente e fase fissa; rapporto fra quantità di campione e resina, mantenimento di un flusso lineare. •Applicazioni dei processi di a valle. Produzione di eritropoietina umana ricombinante (discussione del lavoro teorico);  Purificazione di bioflavonoidi da vegetali: C02 supercritica, e cromatografia in controcorrente.

Laboratorio

Modalità didattiche

 lezioni frontali e laboratorio

Obblighi

Testi di studio

 BIOTECNOLOGIE DI BASE: a cura di Colin Ratledge, Bjørn Kristiansen
Traduzione di Mara Oliveri, revisione di Giorgio Corte 2004, 408 pagine; 39,00 euro, isbn 88-08-07775-6

Modalità di
accertamento

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Testi di studio

BIOTECNOLOGIE DI BASE: a cura di Colin Ratledge, Bjørn Kristiansen
Traduzione di Mara Oliveri, revisione di Giorgio Corte 2004, 408 pagine; 39,00 euro, isbn 88-08-07775-6