Il corso si propone di descrivere alcune recenti applicazioni della ricerca genetica di base e dell’ingegneria genetica nel campo della medicina e delle biotecnologie in generale e di metterne in luce le potenzialità e le problematiche di utilizzo.

Tecniche principali
Il trasferimento di acidi nucleici su membrana
PCR: RT-PCR, real-time PCR, PCR per la diagnosi di infezioni acute e latenti
Sintesi chimica del DNA: metodo della fosforammidite, sintesi di geni
Sequenziamento del DNA: procedimento dei dideossinucleotidi
Taglio e saldatura di molecole di DNA: enzimi di restrizione, DNA ligasi, adattatori, terminal transferasi
Vettori plasmidici: caratteristiche essenziali, pBR322, pUC
Vettori fagici: il batteriofago lambda, replicazione del DNA del fago lambda, utilizzo del fago lambda come vettore.
Vettori cosmidici: caratteristiche generali
Clonaggio in E. coli: vettori di espressione; vettori che massimizzano la sintesi proteica; promotori regolabili: promotore lac, promotore pL, promotore del triptofano; vettori che semplificano la purificazione delle proteine ricombinanti; vettori che favoriscono la solubilizzazione delle proteine espresse.
Produzione di insulina umana in E. coli.
Clonaggio in lievito: vettori episomiali, vettori che si integrano, YAC (yeast artificial chromosome)
Trasferimento genico in cellule animali: cenni
Strategie di clonaggio; il clonaggio di DNA genomico: strategia del Maniatis, il clonaggio di cDNA.
Analisi di genoteche; analisi tramite ibridazione: metodo di Grunstein-Hogness; procedura di plaque-lift. Analisi delle genoteche di espressione (metodo immunologico)

Applicazioni della tecnologia del DNA ricombinante
Animali transgenici: metodo della microiniezione di DNA; metodo del vettore retrovirale; cellule ES; clonazione mediante trasferimento nel nucleo. Applicazione di topi transgenici: studio di funzione e regolazione genica; sistemi modello per le malattie; produzione di proteine ricombinanti. Bovini transgenici. Volatili transgenici.
Acidi nucleici come strumenti diagnostici: diagnosi di malattie infettive, diagnosi prenatale, caratteristiche delle sonde, SNP, RFLP, VNTR.

Modalità didattiche

Lezione frontale

Testi di studio

 

Ingegneria genetica principi e tecniche S. Primrose Zanichelli

Biotecnologia molecolare principi e applicazioni del DNA ricombinante J. Pasternak Zanichelli

Modalità di
accertamento

Esame orale

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Modalità didattiche

Testi di studio

Ingegneria genetica principi e tecniche S. Primrose Zanichelli

Biotecnologia molecolare principi e applicazioni del DNA ricombinante J. Pasternak Zanichelli

Modalità di
accertamento

Esame orale

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.