Il corso si propone di fornire agli studenti le basi teoriche della tecnologia del DNA ricombinante, e l’acquisizione delle metodologie di base per lo studio di geni.

1. Enzimi per il clonaggio del DNA
2. Sistemi biologici della biotecnologia molecolare
3. Biologia di base dei vettori plasmidici e fagici, cosmidi, fasmidi ed altri vettori avanzati
4. La trasformazione genetica dei procarioti
5. Genoteche di DNA genomico e cDNA
5.1 Preparazione del DNA genomico e di cDNA per la generazione di genoteche
5.2 La PCR come alternativa al clonaggio
5.3 Strategie di analisi delle genoteche
6. Tecniche di base della tecnologia del DNA ricombinante
6.1 Elettroforesi in gel d'agarosio
6.2 Trasferimento di acidi nucleici su membrana
6.3 Tecniche di ibridazione e marcatura di acidi nucleici
6.4 Reazione a catena della polimerasi
Attività di laboratorio
Le esercitazioni di laboratorio riguarderanno l'acquisizione delle strategie di base volte alla clonazione di un gene d'interesse a partire da RNA messaggero.
1. Isolamento di RNA in condizioni denaturanti da diversi tessuti di partenza
2. Analisi elettroforetica e spettrofotometrica dell'RNA estratto
3. Sintesi di cDNA dall'RNA isolato, tramite RT-PCR
4. PCR con primers degenerati e PCR nested
5. Ligasi dei prodotti amplificati in vettori plasmidici
6. Trasformazione dei vettori ricombinanti in E.coli e screening dei cloni ottenuti
7. Trasferimento del gene target in idoneo vettore di espressione

Modalità didattiche

Lezione frontale (1 CFU); laboratorio (3 CFU); tesine di approfondimento.

Obblighi

Obbligo di frequenza delle attività di laboratorio, per almeno 2/3 della loro durata.

Testi di studio

• T.A. Brown, Biotecnologie molecolari, Zanichelli
• B.R. Glick, J.J. Pasternak. Biotecnologia molecolare, Zanichelli
• S. Primrose, T. Richard, O. Bob Ingegneria genetica, Zanichelli
• K. Wilson; J. Walker Biochimica e biologia molecolare Principi e tecniche, R.Cortina
• S.J. Karcher, Laboratorio di Biologia molecolare, Zanichelli

Modalità di
accertamento

Esame orale; tesine di approfondimento.

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Testi di studio

Modalità di
accertamento

Disabilità e DSA

Le studentesse e gli studenti che hanno registrato la certificazione di disabilità o la certificazione di DSA presso l'Ufficio Inclusione e diritto allo studio, possono chiedere di utilizzare le mappe concettuali (per parole chiave) durante la prova di esame.

A tal fine, è necessario inviare le mappe, due settimane prima dell’appello di esame, alla o al docente del corso, che ne verificherà la coerenza con le indicazioni delle linee guida di ateneo e potrà chiederne la modifica.

Durante il corso lo studente sarà guidato a redigere un quaderno di laboratorio, dove verranno riportate le esperienze, le metodiche, i dati ottenuti, e la valutazione critica dei risultati, correlando la parte teorica con quella specifica di laboratorio.